關鍵詞：DNA 甲基化；EM-seq™；E5hmC-seq™；酶法甲基化；表觀遺傳學

在生命科學領域，DNA 甲基化作為關鍵的表觀遺傳修飾之一，對基因表達調(diào)控、疾病發(fā)生發(fā)展等起著至關重要的作用。DNA 甲基化是在 DNA 甲基轉移酶的作用下，將甲基基團添加到特定的 DNA 區(qū)域，通常是 CpG 島。這種修飾能夠在不改變 DNA 序列的情況下，影響基因的表達活性。在正常細胞發(fā)育過程中，DNA 甲基化模式精確調(diào)控著基因的時空表達，確保細胞的正常分化和功能維持。而在疾病狀態(tài)下，如腫瘤發(fā)生過程中，DNA 甲基化模式會發(fā)生異常改變，一些抑癌基因的啟動子區(qū)域可能會發(fā)生高甲基化，導致基因表達沉默，無法發(fā)揮抑制腫瘤的作用；同時，一些癌基因的甲基化水平可能降低，使其表達異常活躍，促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移。因此，深入研究 DNA 甲基化對于理解生命過程和攻克疾病具有重要意義。

然而，傳統(tǒng)的重亞硫酸鹽測序（WGBS）因其對 DNA 的破壞性處理、GC 偏好性以及覆蓋度不均等問題，限制了研究的準確性和效率。重亞硫酸鹽處理會使 DNA 中的未甲基化胞嘧啶脫氨基轉變?yōu)槟蜞奏ぃ谆陌奏t保持不變。但這種處理過程會導致 DNA 斷裂和降解，尤其是對于珍貴的微量樣本，如單細胞或游離 DNA（cfDNA），樣本損失嚴重。同時，由于重亞硫酸鹽對不同 GC 含量區(qū)域的處理效率不同，會產(chǎn)生 GC 偏好性，使得測序數(shù)據(jù)在 GC 含量高的區(qū)域覆蓋度過高，而在 GC 含量低的區(qū)域覆蓋度不足，影響數(shù)據(jù)的均一性和準確性。

為了更精準地解析甲基化圖譜，NEB（New England Biolabs）的科學家們憑借深厚的酶學研發(fā)經(jīng)驗和不懈努力，于 2019 年正式推出了 NEBNext® 酶學轉化法甲基化建庫試劑盒（EM-seq™），成為個商業(yè)化酶法甲基化檢測方案，為甲基化研究帶來了變革。

EM-seq™：酶法甲基化測序
EM-seq™是 NEB 的酶法甲基化測序方法，它摒棄了傳統(tǒng)的重亞硫酸鹽處理，避免了 DNA 損傷和片段化，從而實現(xiàn)了對 5mC（5 - 甲基胞嘧啶）和 5hmC（5 - 羥甲基胞嘧啶）的高靈敏度、高準確性檢測。自 2019 年推出以來，EM-seq™系列產(chǎn)品已經(jīng)幫助全球眾多科研工作者在甲基化研究領域取得了突破性進展，其引用文獻數(shù)量已達 500+，充分體現(xiàn)了該技術在學術界的影響力和認可度。